1  粗多糖的测定

1.1  仪器

1.1.1  离心机：4000r/min

1.1.2  50mL离心管或15mL具塞离心管

1.1.3  分光光度计

1.1.4  水浴锅

1.1.5  漩涡混合器

1.2  试剂

实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。

1.2.1  无水乙醇

1.2.2  80%（v/v）乙醇溶液

1.2.3  葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖0.5000g，加水溶解并定容至50mL，此溶液1mL含葡萄糖10mg，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/mL）。

1.2.4  5%苯酚溶液（w/v）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。

1.2.5  浓硫酸（比重1.84）

1.2.6  0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5mL（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5mL(0.2mol/L)磷酸二氢钠混合。

1.3  样品处理

1.3.1  样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0～2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，置沸水浴中加热1h（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（V₁），混匀后过滤，弃去初滤液，收集续滤液供沉淀粗多糖。

1.3.2  沉淀粗多糖：准确吸取1.3.1项下续滤液5.0mL（V₂），置于50mL离心管中（或2.0mL于15mL具塞离心管中），加入无水乙醇20mL（或8mL），混匀，于4℃冰箱静置4h以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（v/v）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残渣用水溶解并定容至10～25mL（V₃）（根据糖浓度而定）。

1.4  标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡萄糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg），置于25mL比色管中，补加水至2.0mL，加入5%苯酚溶液1.0mL，于旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计于485nm波长处，以试剂空白溶液为参比，1cm比色杯测定吸光度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.5  样品测定：准确吸取上液适量（V₄）（含糖0.02～0.08mg），置于25mL比色管中，补加水至2.0mL，然后按1.4项标准曲线的绘制测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。

1.6  结果计算

m₁×V₁×V₃

X = ——————×0.9×100

m₂×V₂×V₄

式中：

X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计），mg/100g；

m₁—样品测定液中葡萄糖的质量，mg；

m₂—样品质量，g；

V₁—样品提取液总体积，mL；

V₂—沉淀粗多糖所用样品提取液体积，mL；

V₃—粗多糖溶液体积，mL；

V₄—测定用样品液体积，mL；

0.9—葡萄糖换算为粗多糖系数。